Kete Mutagenesis Arataki Pae Tere

Tere kotahi te papaanga, he maha ranei nga waahanga o te papa-ira i runga i te ira whaainga i roto i te waahanga kua whakaritea.

Ko te mutagenesis a-pae i roto i te vitro he tikanga whakamatautau nui i roto i nga momo koiora me te rongoa, e whakamahia ana hei whakarereke me te arotau i nga ira whaainga, te tuhura i nga waahi ture o nga kaiwhakatairanga, me te ako hoki i te hononga uaua i waenga i te hanganga me te mahinga o te pūmua. Ka whakamahia e te kete te hangarau rangatira o naianei hei kawe tika i te rereketanga o te papaanga, te rereketanga o te papa-maha tae atu ki te whakauru me te whakakorenga o te rereketanga o te ira whaainga. Ko te rereketanga o te rereketanga o te waahi kotahi ka neke atu i te 90%. Hei taapiri, kaore i rite ki nga kete whakarakei tuku iho e hiahia ana kia maha nga waahanga o te PCR, te mahi-iti me etahi atu mahi-roa me te mahi-mahi, he maamaa ake te whakahaere o te kete, a e wha noa nga waahanga e hiahiatia ana hei hanga i te riaka mutant.

Ngeru. No. Rahinga Peke
44992901 20 rxn

 

 


Taipitopito Hua

FAQ

Tohu Hua

Āhuahira

■ He ngawari, he tere hoki: Ka tango te kete i te hangarau kore whakarei i te whenu plasmid hangarau whakaniko. E 4 noa nga waahanga hei maarama ki te whakarereketanga mai i te momo momo mohoao ki te riaka mutant, me te kore e roa te wa e pau ana me nga mahi-mahi penei i te maha o nga rauna o te PCR me te taatai-iti.
■ Tiwhikete tino whaihua: Ka tangohia e te kete te kaupapa o te hoahoa tuatahi he inaki paparua, kia nui ake ai nga plasmid mutant ka taea ma te whakanui ake.
■ He whanui te whanui: Kaore e taea e te kete te whakarereke i te papaanga takitahi, engari me te rereketanga o te papa-maha. Ka taea te huri ki nga pae e 5.
■ Te urutau kaha: Ka taea e te kete te whakarereke i nga waahanga o te papa ki runga i nga plasmids me te rahi o te rahinga o te 10 kb, te nuinga e hipoki ana i nga plasmid katoa e whakamahia ana.
■ Te tere huringa teitei: kei te kete te mahi reorua mo te tauira methylated plasmid i roto i te vitro me te vivo, me te whakarite kia teitei ake te reanga o te huringa.

Te Whakataunga Whakahoahoa-Whakawhitinga-a-Papa me te Kaupapa PCR

■ Mo te rereketanga o te waahi maha-waahi tuatahi, ka heke iho te utu o te huringa i te rereketanga o te papaanga takitahi na te mea kua piki haere te maha o nga waahi whakarereketanga. E ai ki a maatau raraunga whakamatautau, ka tae ana te maha o nga waahi whakarakei ki te 5, ka heke te reeti takatika ki te 50%. Na reira, i tenei keehi, e taunaki ana kia whakapiki ake i te maha o nga kaute kua whakamanahia.
■ Ka tautokohia e te kete te whakarereke maha-pae-maha o nga waahi, kia taea ai te whakahaere i nga whakamatautau huri i te waa whaanui o nga ira. Ko te rohe o runga o te maha o nga waahi whakarereketanga ko te 5 tonu.
■ E kiia ana ko nga plasmid whakahaere me nga tiiwhikete i tukuna i roto i te kete me whakamahi i nga waahanga whakarereke hou kia pai ai te wetewete i nga raru whakamatautau.

Fast Site-Directed Mutagenesis Kit Fast Site-Directed Mutagenesis Kit

Ka taea te whakarite i nga hua katoa mo te ODM / OEM. Mo nga taipitopito,pāwhiritia koa Ratonga Whakaritea (ODM / OEM)


  • Tōmua:
  • Panuku:

  • product_certificate04 product_certificate01 product_certificate03 product_certificate02
    ×
    Q: Kaore he roopu whakarei

    Tauira A-1

    ■ Kei roto i te tauira he parenga pararau he Taq aukati ranei, me era atu.

    ■ Kaore i oti te taatai ​​o te tauira --— Ka tika te whakanui ake i te paemahana taangata me te whakaroa i te waa whakaheke.

    ■ Te whakaheke i te Tauira ——Whakaarahia te tauira.

    A-2 Tuatahi

    ■ Te ngoikore o te kounga o nga tiimatanga ——Te whakahou i te tuatahi.

    ■ Te whakahekenga Tuatahi ——Whakaitihia te timatanga kukume teitei ki te rahinga iti hei whakaora. Aukati i te maha o te hukapapa me te rewa o te wa-roa kia 4 ° C ranei kia whakawhiwhia.

    ■ Te hoahoa tika o nga tiimatanga (hei tauira, kaore e rawaka te roa o te tiima, he iti ake te ahua i waenga i nga tiimatanga, me etahi atu.)

    A-3 Mg2+kukū

    ■ Mg2+ he iti rawa te kukume ——Tika whakarahi i te Mg2+ kukū: Arotautia te Mg2+ kukume na te raupapa urupare mai i te 1 mM ki te 3 mM me te waahi 0.5 mM ki te whakatau i te Mg tino pai2+ kukū mō ia tauira me te tuatahi.

    A-4 Te taumaha o te pāmahana

    ■ Ko te nui o te mahana whakakapinga e pa ana ki te here o te tuatahi me te tauira. ——Whakaitihia te paemahana whakakotahitanga ka arotahi ki te ahua kia 2 ° C.

    A-5 Taima toronga

    ■ Te wa poto toronga —— Whakanuia te waa whakaroanga.

    Q: He pai he

    Phenomena: Ko nga tauira kino e whakaatu ana i nga raina raupapa whaainga.

    A-1 Whakakorenga o te PCR

    ■ Whakapoke i te raupapa whaainga, ki nga hua whakarahinga ranei—— Kia tupato kaua e pipitihia te tauira kei roto te raupapa whaainga i te tauira kino ka rukuhia atu ki waho o te ngongo centrifuge. Ko nga reagents me nga taputapu ranei kia autoclaved ki te whakakore i nga waikawa karihi o mua, a ko te noho o te paru me whakatau i roto i nga whakamatautau kino kino.

    ■ Whakakorenga reagent ——Whakaahuahia nga reagents ka penapena i te paemahana iti.

    A-2 Pirimiar

    ■ Mg2+ he iti rawa te kukume ——Tika whakarahi i te Mg2+ kukū: Arotautia te Mg2+ kukume na te raupapa urupare mai i te 1 mM ki te 3 mM me te waahi 0.5 mM ki te whakatau i te Mg tino pai2+ kukū mō ia tauira me te tuatahi.

    ■ He huatahi te hoahoa tuatahi, ana ko te raupapa whaainga he homology me te raupapa kore-whaainga. ——Timua-hoahoa hou.

    Q: Whakanui-kore motuhake

    Phenomena: Ko nga roopu whakarei i te PCR kaore e rite ki te rahi e hiahiatia ana, he rahi, he iti ranei, i etahi wa ka puta etahi taura whakarahi motuhake me nga roopu whakanui-kore.

    A-1 Paraimere

    ■ He koretake te whakatikatika

    ——Timua-hoahoa tuatahi.

    ■ He tiketike rawa te kukume tuatahi --—Taapiki whakaniko i te paemahana whakaheke me te whakaroa i te waa whakaheke.

    A-2 Mg2+ kukū

    ■ Te Mg2+ he tiketike rawa te kukume ——Titohia te whakaiti i te kukume Mg2 +: Arotautia te Mg2+ kukume na te raupapa urupare mai i te 1 mM ki te 3 mM me te waahi 0.5 mM ki te whakatau i te Mg tino pai2+ kukū mō ia tauira me te tuatahi.

    A-3 Tino polymerase

    ■ Te nui o te hauhautanga whaainga —— Te whakaiti i te nui o te whiu i te waatea o te 0.5 U.

    A-4 Te taumaha o te pāmahana

    ■ He iti rawa te pāmahana whakauru ——Te tika ana whakapiki i te pāmahana annealing, whakamahia ranei te tikanga taatai ​​e rua nga waahanga

    Nga huringa A-5 PCR

    ■ He maha rawa nga huringa PCR ——Whakaitehia te maha o nga huringa PCR.

    Q: Nga roopu papaki peera ranei

    A-1 Paraimere——Pituhikohikohikohikohikohikohikore ana— mahia ranei ko PCR ohanga.

    A-2 Tauira DNA

    —— Kaore i te ma te tauira ——Whakaarahia te tauira tango i te DNA me nga kete purea ranei.

    A-3 Mg2+ kukū

    ——Mg2+ he tiketike rawa te kukume ——Titohia me whakaiti te Mg2+ kukū: Arotautia te Mg2+ kukume na te raupapa urupare mai i te 1 mM ki te 3 mM me te waahi 0.5 mM ki te whakatau i te Mg tino pai2+ kukū mō ia tauira me te tuatahi.

    A-4 dNTP

    ——Te teitei rawa te kukume o dNTPs——Titihia te kukutanga o dNTP tika

    A-5 Te taumaha o te pāmahana

    ——Te iti rawa te mahana o te whakamomona ——Te tika ana ka whakapiki i te mahana whakamanamana

    Huringa A-6

    ——Te maha rawa o nga huringa ——Ataa te tau huringa

    Q: E hia nga tauira DNA me taapiri ki te punaha urupare 50 μl PCR?
    ytry
    Q: Me pehea te whakanui i nga waahanga roa?

    Ko te mahi tuatahi ko te kowhiri i te polymerase e tika ana. Kaore e taea e te polymerase Taq auau te whakatika na te korenga o te 3'-5 'mahi exonuclease, a na te kore taurite e tino whakaitihia te kaha o te whakaraatanga o nga kongakonga. Na reira, kaore e taea e te Taq polymerase noa te whakanui i nga waahanga whainga nui atu i te 5 kb. Ko te Taq polymerase me nga whakarereke motuhake, tetahi atu polymerase pono ranei, me tohu ki te whakapai ake i te kaha o te toronga, me te whakatutuki i nga hiahia o te waahanga kaha roa. Hei taapiri, ko te whakarahi i nga waahanga roa ka hiahia ano kia whakatikatika i te hoahoa tuatahi, te waa whakahekenga, te waa toronga, te buffer pH, me etahi atu. Hei aukati i te kino o te tauira, me whakaiti te waa whakaheke i te 94 ° C ki te 30 hekere iti iho ranei mo ia huringa, me te wa e piki ai te mahana ki te 94 ° C i mua i te whakarahinga kia iti iho i te 1 meneti. Ano hoki, ko te tautuhi i te mahana whakawhaanui mo te 68 ° C me te hoahoa i te waa whakaroanga kia rite ki te tere o te 1 kb / min ka taea te whakarite kia kaha te whakanui i nga waahanga roa.

    Q: Me pehea te whakapai ake i te pono o te PCR?

    Ka taea te whakaheke i te reanga hapa o te whakanui PCR ma te whakamahi i nga momo polymerases DNA me te pono pono. I roto i nga Taq DNA polymerases katoa i kitea i tenei wa, ko te Pfu enzyme te reiti hapa iti me te pono pono (tirohia te teepu piri). I tua atu i te whiringa o te whākōkī, ka taea e ngā kairangahau te whakaheke i te reanga irakētanga PCR mā te whakarerekē i ngā tikanga tauhohenga, tae atu ki te whakarerekētanga o te whakahanumi, te kukū o te polymerase wera me te whakanui i te tau huringa PCR.

    Tuhia to korero ki konei ka tuku mai ki a maatau