Tohu PCR Hiko Tika

Whakanui tere i te ira whaainga kia tika te whakamahi i te toto hei tauira kaore he tangohanga.

Ko tenei kete e tango ana i te polymerase DNA anti-aukati-i-iria kia pai ai te whakanui i nga ira-kape kotahi i roto i te ira tangata. Ko te punaha miihini tino pai i roto i tenei kete ka awhina i te polymerase ki te aukati i te aukati o nga aukati PCR, na reira ka taea te whakarahi ake i te DNA ma te whakamahi i te toto me nga waahanga ahurea hei tauira. He maamaa te mahi o tenei hua ana kaore e hiahiatia he taahiraa uaua penei i te purenga o te DNA me te tauira tauira ranei.
Ko tenei kete hei 2 × MasterMix, ka taea te urupare ma te whakauru noa i te tauira toto me nga kitenga tuatahi e kitea ana. Ka taea te whakamahi ki nga putake whakangote o nga whakangote penei i te tangata, kiore, poaka, kau me etahi atu momo, tae atu ki te 4 ℃ cryopreserve toto katoa, anticoagulant (EDTA, citrate, heparin), toto whakapoke toto me nga maroke toto. rongoa i runga i nga kaari hokohoko Whatman 903 me FTA Elute.

Ngeru. No.	Rahinga Peke
4992529	20 µl × 100 rxn
4992530	20 µl × 500 rxn

Tukuna imeera ki a maatau

Taipitopito Hua

Tauira Whakamatau

FAQ

Tohu Hua

Āhuahira

■ He ngawari, he tere hoki: Ka taea te whakamahi tika i te whakaoranga PCR ma te whakamahi i te toto hei tauira, me te kore e hiahiatia he taahiraa whakarihariha mo te whakarite tauira me te tangohanga DNA.
■ Te tino ma: Ko te peke o te tauira i mua i te maimoatanga me nga taahiraa tangohanga DNA ka taea te karo ki te kore e whakapoke i nga tauira.
■ Whakaaetanga nui: Ko te tautuhi PCR mo nga tauira nui-nui ka taea ma te whakakotahi i te kete me nga papa PCR 96/384-pai.
■ Te kaha o te ao: Ka taea e tenei kete te whakanui i nga waahanga GC teitei ranei, nga waahanga ranei me te hanganga tuarua o te kura, a ko te roa o te whakarahi ka tae atu ki te 5 kb.
■ Te aukati i te ahotea kaha: Ka taea te tono i tenei kete mo nga momo momo me nga tauira toto e tiakina ana i roto i nga momo huarahi.

Nga tono

Ko nga hua PCR o tenei kete he "A" kei te 3'-mutunga, ka taea te whakamahi tika mo te taatai karakara TA. Ka taea te whakamahi i tenei kete hei whakanui i nga waahanga DNA genomic, tino-whakaputa whakaputanga taatai me te taatai (penei i te kitenga ira) te wetewete.

Ka taea te whakarite i nga hua katoa mo te ODM / OEM. Mo nga taipitopito,pāwhiritia koa Ratonga Whakaritea (ODM / OEM)

Tōmua: TIANcombi DNA Hini & Kit PCR Det

Panuku: Kete PCR Hono Tuuturu

	Ma te whakamahi i te anticoagulation a te tangata EDTA hei tauira, e 4 nga ira me nga momo korero GC i whakapakarihia e te Tohu PCR Poto Toto. Ko te punaha urupare PCR ko te 20 μl, a ko te 1 μl toto i whakamahia hei tauira. M: TIANGEN Tohu II; 1: Rahi o te waahanga 1090 bp, GC korero 68.1%; 2: Rahi whatianga 1915 bp, GC ihirangi 70.4%; 3: Rahi whatianga 448 bp, GC ihirangi 74.8%; 4: Te rahi o te waahanga 1527 bp, te ihirangi GC 61.5%. Nga Hua Whakamatau: Ka taea e te Kit PCR Toto Toto te whakanui i nga waahanga DNA me nga korero GC i te whānuitanga o te 61.5% -74.8%, e kii ana ka kaha ki te whakanui i nga waahanga-nui-GC.
	Ma te whakamahi i te anticoagulation a te tangata EDTA hei tauira, e 5 nga ira me nga roanga rereke (ActB, Prp, DN1.0, Hn2.0 me Hn4.0) i whakarahihia e te Tika PCR Kit. Ko te punaha urupare PCR ko te 20 μl, a ko te 1 μl toto i whakamahia hei tauira. M: TIANGEN Tohu II; 1-3: 3 tauira toto rereke; NTC: mana me te kore he tuatahi. Nga Hua Whakamatau: Ka taea e te Kit PCR Toto Toto te whakanui i nga waahanga me te roa tae atu ki te 4 kb, e kii ana ka kaha ki te whakarahi i nga waahanga roa.
	Ma te whakamahi i te anticoagulation a te tangata EDTA hei tauira, I whakamahia te Tika PCR Toto mo te kitenga PCR o nga tauira toto rereke. Ko te punaha urupare PCR ko te 20 μl, a ko te 1 μl toto i whakamahia hei tauira. M: TIANGEN Tohu II; 1-9: ko te utanga o te toto he 0.1 μl, 0.2 μl, 0.3 μl, 0.4 μl, 1 μl, 2 μl, 3 μl, 4 μl me 5 μl, ia; NTC: mana me te kore tauira Nga Hua Whakamatau: Ko te Kit PCR Toto Tinana he kaha ki te aukati i te toto, ka taea te whakanui ake i nga tauira toto me te rahinga utanga o te 0.1-5 μl.
	Ko nga tauira toto mai i te tangata, te kiore, te heihei me etahi atu momo me nga maimoatanga rereke i whakamahia hei tauira. I whakamahia te Kit PCR Toto Toto hei whakanui i te PRNP (tangata, 750 bp), Actin (kiore, 200 bp), me te β-Actin (Heihei, 1.0 kb). Ko te punaha urupare PCR ko te 20 μl, a ko te 1 μl toto i whakamahia hei tauira. M: TIANGEN Tohu II. Nga Hua Whakamatau: Ka taea te whakamahi i te Kit PCR Toto Toto i runga i te maha o nga tauira, a ka kitea te kitenga PCR tika i runga i nga tauira toto mai i nga momo momo me nga maimoatanga rereke.

Q: Kaore he roopu whakarei

Tauira A-1

■ Kei roto i te tauira he parenga pararau he Taq aukati ranei, me era atu.

■ Kaore i oti te taatai o te tauira --— Ka tika te whakanui ake i te paemahana taangata me te whakaroa i te waa whakaheke.

■ Te whakaheke i te Tauira ——Whakaarahia te tauira.

A-2 Tuatahi

■ Te ngoikore o te kounga o nga tiimatanga ——Te whakahou i te tuatahi.

■ Te whakahekenga Tuatahi ——Whakaitihia te timatanga kukume teitei ki te rahinga iti hei whakaora. Aukati i te maha o te hukapapa me te rewa o te wa-roa kia 4 ° C ranei kia whakawhiwhia.

■ Te hoahoa tika o nga tiimatanga (hei tauira, kaore e rawaka te roa o te tiima, he iti ake te ahua i waenga i nga tiimatanga, me etahi atu.)

A-3 Mg²⁺kukū

■ Mg²⁺ he iti rawa te kukume ——Tika whakarahi i te Mg²⁺kukū: Arotautia te Mg²⁺ kukume na te raupapa urupare mai i te 1 mM ki te 3 mM me te waahi 0.5 mM ki te whakatau i te Mg tino pai²⁺ kukū mō ia tauira me te tuatahi.

A-4 Te taumaha o te pāmahana

■ Ko te nui o te mahana whakakapinga e pa ana ki te here o te tuatahi me te tauira. ——Whakaitihia te paemahana whakakotahitanga ka arotahi ki te ahua kia 2 ° C.

A-5 Taima toronga

■ Te wa poto toronga —— Whakanuia te waa whakaroanga.

Q: He pai he

Phenomena: Ko nga tauira kino e whakaatu ana i nga raina raupapa whaainga.

A-1 Whakakorenga o te PCR

■ Whakapoke i te raupapa whaainga, ki nga hua whakarahinga ranei—— Kia tupato kaua e pipitihia te tauira kei roto te raupapa whaainga i te tauira kino ka rukuhia atu ki waho o te ngongo centrifuge. Ko nga reagents me nga taputapu ranei kia autoclaved ki te whakakore i nga waikawa karihi o mua, a ko te noho o te paru me whakatau i roto i nga whakamatautau kino kino.

■ Whakakorenga reagent ——Whakaahuahia nga reagents ka penapena i te paemahana iti.

A-2 Pirimiar

■ Mg²⁺ he iti rawa te kukume ——Tika whakarahi i te Mg²⁺ kukū: Arotautia te Mg²⁺ kukume na te raupapa urupare mai i te 1 mM ki te 3 mM me te waahi 0.5 mM ki te whakatau i te Mg tino pai²⁺ kukū mō ia tauira me te tuatahi.

■ He huatahi te hoahoa tuatahi, ana ko te raupapa whaainga he homology me te raupapa kore-whaainga. ——Timua-hoahoa hou.

Q: Whakanui-kore motuhake

Phenomena: Ko nga roopu whakarei i te PCR kaore e rite ki te rahi e hiahiatia ana, he rahi, he iti ranei, i etahi wa ka puta etahi taura whakarahi motuhake me nga roopu whakanui-kore.

A-1 Paraimere

■ He koretake te whakatikatika

——Timua-hoahoa tuatahi.

■ He tiketike rawa te kukume tuatahi --—Taapiki whakaniko i te paemahana whakaheke me te whakaroa i te waa whakaheke.

A-2 Mg²⁺ kukū

■ Te Mg²⁺ he tiketike rawa te kukume ——Titohia te whakaiti i te kukume Mg2 +: Arotautia te Mg²⁺ kukume na te raupapa urupare mai i te 1 mM ki te 3 mM me te waahi 0.5 mM ki te whakatau i te Mg tino pai²⁺ kukū mō ia tauira me te tuatahi.

A-3 Tino polymerase

■ Te nui o te hauhautanga whaainga —— Te whakaiti i te nui o te whiu i te waatea o te 0.5 U.

A-4 Te taumaha o te pāmahana

■ He iti rawa te pāmahana whakauru ——Te tika ana whakapiki i te pāmahana annealing, whakamahia ranei te tikanga taatai e rua nga waahanga

Nga huringa A-5 PCR

■ He maha rawa nga huringa PCR ——Whakaitehia te maha o nga huringa PCR.

Q: Nga roopu papaki peera ranei

A-1 Paraimere——Pituhikohikohikohikohikohikohikore ana— mahia ranei ko PCR ohanga.

A-2 Tauira DNA

—— Kaore i te ma te tauira ——Whakaarahia te tauira tango i te DNA me nga kete purea ranei.

A-3 Mg²⁺ kukū

——Mg²⁺ he tiketike rawa te kukume ——Titohia me whakaiti te Mg²⁺ kukū: Arotautia te Mg²⁺ kukume na te raupapa urupare mai i te 1 mM ki te 3 mM me te waahi 0.5 mM ki te whakatau i te Mg tino pai²⁺ kukū mō ia tauira me te tuatahi.

A-4 dNTP

——Te teitei rawa te kukume o dNTPs——Titihia te kukutanga o dNTP tika

A-5 Te taumaha o te pāmahana

——Te iti rawa te mahana o te whakamomona ——Te tika ana ka whakapiki i te mahana whakamanamana

Huringa A-6

——Te maha rawa o nga huringa ——Ataa te tau huringa

Q: E hia nga tauira DNA me taapiri ki te punaha urupare 50 μl PCR?

Q: Me pehea te whakanui i nga waahanga roa?

Ko te mahi tuatahi ko te kowhiri i te polymerase e tika ana. Kaore e taea e te polymerase Taq auau te whakatika na te korenga o te 3'-5 'mahi exonuclease, a na te kore taurite e tino whakaitihia te kaha o te whakaraatanga o nga kongakonga. Na reira, kaore e taea e te Taq polymerase noa te whakanui i nga waahanga whainga nui atu i te 5 kb. Ko te Taq polymerase me nga whakarereke motuhake, tetahi atu polymerase pono ranei, me tohu ki te whakapai ake i te kaha o te toronga, me te whakatutuki i nga hiahia o te waahanga kaha roa. Hei taapiri, ko te whakarahi i nga waahanga roa ka hiahia ano kia whakatikatika i te hoahoa tuatahi, te waa whakahekenga, te waa toronga, te buffer pH, me etahi atu. Hei aukati i te kino o te tauira, me whakaiti te waa whakaheke i te 94 ° C ki te 30 hekere iti iho ranei mo ia huringa, me te wa e piki ai te mahana ki te 94 ° C i mua i te whakarahinga kia iti iho i te 1 meneti. Ano hoki, ko te tautuhi i te mahana whakawhaanui mo te 68 ° C me te hoahoa i te waa whakaroanga kia rite ki te tere o te 1 kb / min ka taea te whakarite kia kaha te whakanui i nga waahanga roa.

Q: Me pehea te whakapai ake i te pono o te PCR?

Ka taea te whakaheke i te reanga hapa o te whakanui PCR ma te whakamahi i nga momo polymerases DNA me te pono pono. I roto i nga Taq DNA polymerases katoa i kitea i tenei wa, ko te Pfu enzyme te reiti hapa iti me te pono pono (tirohia te teepu piri). I tua atu i te whiringa o te whākōkī, ka taea e ngā kairangahau te whakaheke i te reanga irakētanga PCR mā te whakarerekē i ngā tikanga tauhohenga, tae atu ki te whakarerekētanga o te whakahanumi, te kukū o te polymerase wera me te whakanui i te tau huringa PCR.

Tuhia to korero ki konei ka tuku mai ki a maatau