Kete PCR HiFidelity Ultra

Pono teitei, tino tuuturu me te tino whaihua-tiimata PCR-miimuri.

Ko te Ultra HiFidelity PCR Kit he hou-pono pono PCR whakarei i te tohu pai mo te PCR-e pa ana ki te tohu me te kitenga. Ko te Ultra HiFi DNA Polymerase kei roto i te kete he mea tere me te pono-pono o te polymerase DNA i hangaia e te hangarau whanaketanga ngota ngota. Ka whakarei ake i te honohono o te polymerase DNA ki nga tauira, whakapai ake i te tere whakarahinga me te kaha toronga o te whākōkī, me te whakapiki i te angitu angitu o te PCR me te hua o te hua.

Ngeru. No.	Rahinga Peke
4992970	1ml
4992971	5 * 1ml
4992978	5 * 5 * 1ml

Tukuna imeera ki a maatau

Taipitopito Hua

Tauira Whakamatau

FAQ

Tohu Hua

Āhuahira

■ He ngawari ki te whakahaere: Ko tenei kete ka tohaina hei tohu 2 × me te PCR ka taea ma te whakauru noa i nga tauira me nga mea tuatahi.
■ Pono teitei: Ko te pono e 50 nga wa o Taq polymerase.
■ Tino motuhake: Tino pai te mahi tiimata-whakarite kia maarama te hua ..
■ Whakanui tere: Ka tae te tere toronga ki te 10-15 hekona / kb.
■ Te kaha o te whakawhaanui: Ka tae ki te 20 kb nga waahanga DNA ka taea te whakakaha.
■ Whanui whakamahi: Ko te kete kei roto ko te PCR Enhancer a he pai mo te whakarahi i te GC nui me nga tauira uaua.

Whakatakotoranga

Momo: Te pono o te pono Polymerase DNA
Tere whakarahi: 10-15 hekona / kb
Rahi whatianga: <20kb
Nga tono: Ko te pono nui PCR whakarei, taarua tohu, whakaniko tauira GC teitei, whakapiki ira o nga momo matatini, cDNA teitei pono pono, kitenga SNP, whakarereketanga motuhake o te papaanga, me etahi atu.
Hua Tango DNA mai i nga tini tipu tipu:
Panui: Ko te hua o te DNA ka whakawhirinaki ki nga momo tauira. Ko nga rauemi katoa i runga ake nei no te rau ngawari.

Ka taea te whakarite i nga hua katoa mo te ODM / OEM. Mo nga taipitopito,pāwhiritia koa Ratonga Whakaritea (ODM / OEM)

Tōmua: 2 × Pfu PCR Whakaranu

Panuku: QuantScript RT Kit

	Hot-tiimata ki te whakarite kia motuhake te hua Whakaahua 1. He tino pai te mahi whakaoho wera a te Ultra HiFi kia pai ai te noho motuhake o nga hua whakarahinga. I whakamahia te tikanga rama rama (Ma et al., Anal Biochem, 2006).
	He tino pono pono, 50 nga wa teitei ake i te Taq Polymerase Whakaatu 2. Ko te pono o te Ultra HiFi he 50 nga wa teitei ake i te Taq polymerase noa. Ko te pono pono o te Taq polymerase (kaore he mahi whakatika) ka whakamahia hei tohutoro.
	Ko te whakanui tere me nga waahanga roa ka taea te whakakaha tere Whakaahua 3. Ka taea e te Ultra HiFi te toro atu ki te 5 sec / kb mo nga waahanga iti ake i te 4 kb. Mo nga waahanga roa, ka taea te whakarahi tika i te waa whakanui. Mo nga kongakonga neke atu i te 15 kb, ko te tere tere tae atu ki te 30 sec / kb. M: TIANGEN D15000 Tohu
	Ko te kaha o te ao me te tino taunga, he ngawari ki te panui i te GC teitei me nga waahanga roa mai i nga momo rauemi Whakaahua 4. Ultra HiFi he tino kiko hei whakarite i te tere angitu o te hua me te rahinga hua mo nga momo tauira tauira. A. Nga hua whakarakei Ultra HiFi B. Hi-Fi hua whakanui i te whākōkī o te Kaiwhakarato K C. Hi-Fi hua whakanui i te whākōkī o te Kaiwhakarato N M: TIANGEN D15000 Tohu Huarahi 1-5. Nga hua whakarei ake i nga tauira he rerekee te roa: 1. 750 bp; 2. 1 kb; 3. 2 kb; 4. 4 kb; 5. 6 kb Ara 6. Ko te hua whakarei ake i te tauira GC nui: 1915 bp (GC%: 70%); Ara 7-11. Hua whakarahinga o nga tauira 2 kb mai i nga momo genome: 7. Kiore; 8. Raihi; 9. Witi; 10. Korni; 11. Huakita; Huarahi 12-14. 8 kb hua whakareatanga whatianga roa: 12. Raihi; 13. Korni;

Q: Kaore he roopu whakarei

Tauira A-1

■ Kei roto i te tauira he parenga pararau he Taq aukati ranei, me era atu.

■ Kaore i oti te taatai o te tauira --— Ka tika te whakanui ake i te paemahana taangata me te whakaroa i te waa whakaheke.

■ Te whakaheke i te Tauira ——Whakaarahia te tauira.

A-2 Tuatahi

■ Te ngoikore o te kounga o nga tiimatanga ——Te whakahou i te tuatahi.

■ Te whakahekenga Tuatahi ——Whakaitihia te timatanga kukume teitei ki te rahinga iti hei whakaora. Aukati i te maha o te hukapapa me te rewa o te wa-roa kia 4 ° C ranei kia whakawhiwhia.

■ Te hoahoa tika o nga tiimatanga (hei tauira, kaore e rawaka te roa o te tiima, he iti ake te ahua i waenga i nga tiimatanga, me etahi atu.)

A-3 Mg²⁺kukū

■ Mg²⁺ he iti rawa te kukume ——Tika whakarahi i te Mg²⁺kukū: Arotautia te Mg²⁺ kukume na te raupapa urupare mai i te 1 mM ki te 3 mM me te waahi 0.5 mM ki te whakatau i te Mg tino pai²⁺ kukū mō ia tauira me te tuatahi.

A-4 Te taumaha o te pāmahana

■ Ko te nui o te mahana whakakapinga e pa ana ki te here o te tuatahi me te tauira. ——Whakaitihia te paemahana whakakotahitanga ka arotahi ki te ahua kia 2 ° C.

A-5 Taima toronga

■ Te wa poto toronga —— Whakanuia te waa whakaroanga.

Q: He pai he

Phenomena: Ko nga tauira kino e whakaatu ana i nga raina raupapa whaainga.

A-1 Whakakorenga o te PCR

■ Whakapoke i te raupapa whaainga, ki nga hua whakarahinga ranei—— Kia tupato kaua e pipitihia te tauira kei roto te raupapa whaainga i te tauira kino ka rukuhia atu ki waho o te ngongo centrifuge. Ko nga reagents me nga taputapu ranei kia autoclaved ki te whakakore i nga waikawa karihi o mua, a ko te noho o te paru me whakatau i roto i nga whakamatautau kino kino.

■ Whakakorenga reagent ——Whakaahuahia nga reagents ka penapena i te paemahana iti.

A-2 Pirimiar

■ Mg²⁺ he iti rawa te kukume ——Tika whakarahi i te Mg²⁺ kukū: Arotautia te Mg²⁺ kukume na te raupapa urupare mai i te 1 mM ki te 3 mM me te waahi 0.5 mM ki te whakatau i te Mg tino pai²⁺ kukū mō ia tauira me te tuatahi.

■ He huatahi te hoahoa tuatahi, ana ko te raupapa whaainga he homology me te raupapa kore-whaainga. ——Timua-hoahoa hou.

Q: Whakanui-kore motuhake

Phenomena: Ko nga roopu whakarei i te PCR kaore e rite ki te rahi e hiahiatia ana, he rahi, he iti ranei, i etahi wa ka puta etahi taura whakarahi motuhake me nga roopu whakanui-kore.

A-1 Paraimere

■ He koretake te whakatikatika

——Timua-hoahoa tuatahi.

■ He tiketike rawa te kukume tuatahi --—Taapiki whakaniko i te paemahana whakaheke me te whakaroa i te waa whakaheke.

A-2 Mg²⁺ kukū

■ Te Mg²⁺ he tiketike rawa te kukume ——Titohia te whakaiti i te kukume Mg2 +: Arotautia te Mg²⁺ kukume na te raupapa urupare mai i te 1 mM ki te 3 mM me te waahi 0.5 mM ki te whakatau i te Mg tino pai²⁺ kukū mō ia tauira me te tuatahi.

A-3 Tino polymerase

■ Te nui o te hauhautanga whaainga —— Te whakaiti i te nui o te whiu i te waatea o te 0.5 U.

A-4 Te taumaha o te pāmahana

■ He iti rawa te pāmahana whakauru ——Te tika ana whakapiki i te pāmahana annealing, whakamahia ranei te tikanga taatai e rua nga waahanga

Nga huringa A-5 PCR

■ He maha rawa nga huringa PCR ——Whakaitehia te maha o nga huringa PCR.

Q: Nga roopu papaki peera ranei

A-1 Paraimere——Pituhikohikohikohikohikohikohikore ana— mahia ranei ko PCR ohanga.

A-2 Tauira DNA

—— Kaore i te ma te tauira ——Whakaarahia te tauira tango i te DNA me nga kete purea ranei.

A-3 Mg²⁺ kukū

——Mg²⁺ he tiketike rawa te kukume ——Titohia me whakaiti te Mg²⁺ kukū: Arotautia te Mg²⁺ kukume na te raupapa urupare mai i te 1 mM ki te 3 mM me te waahi 0.5 mM ki te whakatau i te Mg tino pai²⁺ kukū mō ia tauira me te tuatahi.

A-4 dNTP

——Te teitei rawa te kukume o dNTPs——Titihia te kukutanga o dNTP tika

A-5 Te taumaha o te pāmahana

——Te iti rawa te mahana o te whakamomona ——Te tika ana ka whakapiki i te mahana whakamanamana

Huringa A-6

——Te maha rawa o nga huringa ——Ataa te tau huringa

Q: E hia nga tauira DNA me taapiri ki te punaha urupare 50 μl PCR?

Q: Me pehea te whakanui i nga waahanga roa?

Ko te mahi tuatahi ko te kowhiri i te polymerase e tika ana. Kaore e taea e te polymerase Taq auau te whakatika na te korenga o te 3'-5 'mahi exonuclease, a na te kore taurite e tino whakaitihia te kaha o te whakaraatanga o nga kongakonga. Na reira, kaore e taea e te Taq polymerase noa te whakanui i nga waahanga whainga nui atu i te 5 kb. Ko te Taq polymerase me nga whakarereke motuhake, tetahi atu polymerase pono ranei, me tohu ki te whakapai ake i te kaha o te toronga, me te whakatutuki i nga hiahia o te waahanga kaha roa. Hei taapiri, ko te whakarahi i nga waahanga roa ka hiahia ano kia whakatikatika i te hoahoa tuatahi, te waa whakahekenga, te waa toronga, te buffer pH, me etahi atu. Hei aukati i te kino o te tauira, me whakaiti te waa whakaheke i te 94 ° C ki te 30 hekere iti iho ranei mo ia huringa, me te wa e piki ai te mahana ki te 94 ° C i mua i te whakarahinga kia iti iho i te 1 meneti. Ano hoki, ko te tautuhi i te mahana whakawhaanui mo te 68 ° C me te hoahoa i te waa whakaroanga kia rite ki te tere o te 1 kb / min ka taea te whakarite kia kaha te whakanui i nga waahanga roa.

Q: Me pehea te whakapai ake i te pono o te PCR?

Ka taea te whakaheke i te reanga hapa o te whakanui PCR ma te whakamahi i nga momo polymerases DNA me te pono pono. I roto i nga Taq DNA polymerases katoa i kitea i tenei wa, ko te Pfu enzyme te reiti hapa iti me te pono pono (tirohia te teepu piri). I tua atu i te whiringa o te whākōkī, ka taea e ngā kairangahau te whakaheke i te reanga irakētanga PCR mā te whakarerekē i ngā tikanga tauhohenga, tae atu ki te whakarerekētanga o te whakahanumi, te kukū o te polymerase wera me te whakanui i te tau huringa PCR.

Tuhia to korero ki konei ka tuku mai ki a maatau