2 × Taq Platinum PCR Mix
Whakaahuatanga Mahi
1 waeine (U) Taq Platinum DNA Mahi Polymerase kua tautuhia hei nui o te whākōkī e hiahiatia ana ki te whakauru i te 10 nmol deoxynucleotides ki ngā matū waikawa-waikawa i te 74 ° C i roto i te 30 meneti me te whakamahi i te DNA parāone hāmana hei tauira / tiimua.
Whakahaere Kounga
Ko te maamaa ma te kitenga SDS-PAGE he nui ake i te 99%; Kaore e kitea nga mahi o te nuclease kaha; Ko te ira kotahi-kape i roto i te ira tangata ka taea te whakakaha ake; Kaore he rereketanga o nga ngohe nui ka purihia ki te mahana o te ruuma mo te kotahi wiki.
Nga Tohu Hangarau Matua
He mahinga 5'-3 "me te ngoikoretanga a 3'-5", a ko te pono kei te taha o te Pfu polymerase. Ko te tere toronga o Taq Platinum Polymerase he tere atu i te Pfu polymerase a he teitei ake te kaha whakarei. Ko nga hua PCR ka taea te hono totika atu ki te pito puhakihia kia hangai ranei ki te tohu TA. Mena me whakapai ake te kakama o te whakakii, me whakahau kia purea tuatahi ka taapirihia he 3'-dA overhangs i mua i te taatai ki te taurangi TA.
Kotahi-ngongo Taq Platinum MasterMix (Tiwhikete Hua Nui-a-Motu)
■ Ko te Taq Platinum MasterMix kua pai ake te kiko me te maarama o te urupare PCR a ka taea te whakarahi i nga tauira uaua me te nui o nga korero GC, te hanganga tuarua me nga mea pera. Ko te iti rawa i te 2 kape o te tauira tauira ka taea te whakakaha ake, kia pai ake ai nga hua o nga whakamatautau.
■ Ko te taake ahurei Taq Platinum MasterMix ka pumau te punaha tauhohenga katoa, ana kaore te mahi e raru i te toenga-waikawa o te wa-roa, te rokiroki mo te wa-roa i te 4 ° C.
■ Ma te pumau me te pai o te rongoa whakauru PCR kua oti te whakarite, ka tere ake te mahi, ka ngawari te whakaiti i te kaha o te kaimahi me te hapa tauira. Ko te kaiwhakangungu PCR tino-mahi me te kaiwhakanao kua whakauruhia ki te ranunga, ka whakaheke i nga whakaritenga mo nga tikanga PCR.
■ Kei roto i tenei hua nga tikanga tae-tae me te kore tae-tae. Ko nga hua MasterMix tae-tae ka taea te hiko hiko i muri i te PCR, me te kore e taapiri i te paati.
Nga tono
Ka taea e ia te whakakapi i te Pfu polymerase hei whakanui i nga hua pono pono mai i nga tauira uaua penei i te ira, a he pai mo nga tono penei i te whakatauira i nga ira whakaputa, whakarereketanga-motuhake me te wetewete i te kotahi polymorphism nucleotide (SNP), me era atu.
Whakatupato ki te Hoahoa PCR Tuatahi:
Ko te roa tuatahi ko te 20-25 mer. Heoi, i te wa e mahi ana i te waahanga maramara PCR, me whakanui te roa o te tuatahi ki te 30-35 mer.
■ Kaore he takirua takirua i waenga i nga timatanga e rua, ina koa mo nga turanga 3 whakamutunga i te mutunga o te 3 '.
■ Ko te kiko GC kia 50-60%, ka karo i nga rangatira o te rohe, AT ranei. Kia pai ai te hono o te tuatahi me te tauira, me karo i te hanga AT i te pito 3 '.
■ A ape i te timatanga ki te hanga hanganga tuarua.
■ Tiwhiria nga primers e rua me nga pāmahana Tm tata ki a raatau.
Te Tatau i te Uara Tm o nga Paraimere mo te PCR:
■ Ka iti ake te tiima i te 20 mer: Tm = 2 ° C × (A + T) + 4 ° C × (G + C).
■ Ka nui ake te tiima i te 20 mer: Tm = 81.5 + 0.41 × (GC%) - 600 / L, ko te L te roa o te tuatahi.
■ Whakaritehia te paemahana whakauru ki (Tm-5) ° C.
Whakauru Tuatahi PCR
Ko te kukume whakamutunga e tika ana o nga mea tuatahi ka taea te whiriwhiri i waenga i te 0.1 μM me te 1.0 μM. Na te iti o te kukume o te timatanga ka iti ake te hua o nga hua whakarei, i te nui rawa o te kukume tuatahi ka kaha ki te whakanui ake-kore. I te nuinga o te waa, ka nui te rahi o te tauira DNA he taatai tauira uaua ranei (penei i te DNA ira tangata) ka whakamahia hei tauira, me heke te kohinga tuatahi. Mena he iti te rahi o te tauira DNA he tauira ngawari ranei te tauira DNA (hei tauira, DNA plasmid, me etahi atu) hei tauira, me teitei ake te kohinga tuatahi.
Ka taea te whakarite i nga hua katoa mo te ODM / OEM. Mo nga taipitopito,pāwhiritia koa Ratonga Whakaritea (ODM / OEM)
  |
Whakamahia te genomic DNA hei tauira hei whakanui i te kongakonga 1 kb. I muri i te urupare PCR, tangohia he 5 μl mo te kitenga electrophoresis. |
Tauira A-1
■ Kei roto i te tauira he parenga pararau he Taq aukati ranei, me era atu.
■ Kaore i oti te taatai o te tauira --— Ka tika te whakanui ake i te paemahana taangata me te whakaroa i te waa whakaheke.
■ Te whakaheke i te Tauira ——Whakaarahia te tauira.
A-2 Tuatahi
■ Te ngoikore o te kounga o nga tiimatanga ——Te whakahou i te tuatahi.
■ Te whakahekenga Tuatahi ——Whakaitihia te timatanga kukume teitei ki te rahinga iti hei whakaora. Aukati i te maha o te hukapapa me te rewa o te wa-roa kia 4 ° C ranei kia whakawhiwhia.
■ Te hoahoa tika o nga tiimatanga (hei tauira, kaore e rawaka te roa o te tiima, he iti ake te ahua i waenga i nga tiimatanga, me etahi atu.)
A-3 Mg2+kukū
■ Mg2+ he iti rawa te kukume ——Tika whakarahi i te Mg2+ kukū: Arotautia te Mg2+ kukume na te raupapa urupare mai i te 1 mM ki te 3 mM me te waahi 0.5 mM ki te whakatau i te Mg tino pai2+ kukū mō ia tauira me te tuatahi.
A-4 Te taumaha o te pāmahana
■ Ko te nui o te mahana whakakapinga e pa ana ki te here o te tuatahi me te tauira. ——Whakaitihia te paemahana whakakotahitanga ka arotahi ki te ahua kia 2 ° C.
A-5 Taima toronga
■ Te wa poto toronga —— Whakanuia te waa whakaroanga.
Phenomena: Ko nga tauira kino e whakaatu ana i nga raina raupapa whaainga.
A-1 Whakakorenga o te PCR
■ Whakapoke i te raupapa whaainga, ki nga hua whakarahinga ranei—— Kia tupato kaua e pipitihia te tauira kei roto te raupapa whaainga i te tauira kino ka rukuhia atu ki waho o te ngongo centrifuge. Ko nga reagents me nga taputapu ranei kia autoclaved ki te whakakore i nga waikawa karihi o mua, a ko te noho o te paru me whakatau i roto i nga whakamatautau kino kino.
■ Whakakorenga reagent ——Whakaahuahia nga reagents ka penapena i te paemahana iti.
A-2 Pirimiar
■ Mg2+ he iti rawa te kukume ——Tika whakarahi i te Mg2+ kukū: Arotautia te Mg2+ kukume na te raupapa urupare mai i te 1 mM ki te 3 mM me te waahi 0.5 mM ki te whakatau i te Mg tino pai2+ kukū mō ia tauira me te tuatahi.
■ He huatahi te hoahoa tuatahi, ana ko te raupapa whaainga he homology me te raupapa kore-whaainga. ——Timua-hoahoa hou.
Phenomena: Ko nga roopu whakarei i te PCR kaore e rite ki te rahi e hiahiatia ana, he rahi, he iti ranei, i etahi wa ka puta etahi taura whakarahi motuhake me nga roopu whakanui-kore.
A-1 Paraimere
■ He koretake te whakatikatika
——Timua-hoahoa tuatahi.
■ He tiketike rawa te kukume tuatahi --—Taapiki whakaniko i te paemahana whakaheke me te whakaroa i te waa whakaheke.
A-2 Mg2+ kukū
■ Te Mg2+ he tiketike rawa te kukume ——Titohia te whakaiti i te kukume Mg2 +: Arotautia te Mg2+ kukume na te raupapa urupare mai i te 1 mM ki te 3 mM me te waahi 0.5 mM ki te whakatau i te Mg tino pai2+ kukū mō ia tauira me te tuatahi.
A-3 Tino polymerase
■ Te nui o te hauhautanga whaainga —— Te whakaiti i te nui o te whiu i te waatea o te 0.5 U.
A-4 Te taumaha o te pāmahana
■ He iti rawa te pāmahana whakauru ——Te tika ana whakapiki i te pāmahana annealing, whakamahia ranei te tikanga taatai e rua nga waahanga
Nga huringa A-5 PCR
■ He maha rawa nga huringa PCR ——Whakaitehia te maha o nga huringa PCR.
A-1 Paraimere——Pituhikohikohikohikohikohikohikore ana— mahia ranei ko PCR ohanga.
A-2 Tauira DNA
—— Kaore i te ma te tauira ——Whakaarahia te tauira tango i te DNA me nga kete purea ranei.
A-3 Mg2+ kukū
——Mg2+ he tiketike rawa te kukume ——Titohia me whakaiti te Mg2+ kukū: Arotautia te Mg2+ kukume na te raupapa urupare mai i te 1 mM ki te 3 mM me te waahi 0.5 mM ki te whakatau i te Mg tino pai2+ kukū mō ia tauira me te tuatahi.
A-4 dNTP
——Te teitei rawa te kukume o dNTPs——Titihia te kukutanga o dNTP tika
A-5 Te taumaha o te pāmahana
——Te iti rawa te mahana o te whakamomona ——Te tika ana ka whakapiki i te mahana whakamanamana
Huringa A-6
——Te maha rawa o nga huringa ——Ataa te tau huringa
Ko te mahi tuatahi ko te kowhiri i te polymerase e tika ana. Kaore e taea e te polymerase Taq auau te whakatika na te korenga o te 3'-5 'mahi exonuclease, a na te kore taurite e tino whakaitihia te kaha o te whakaraatanga o nga kongakonga. Na reira, kaore e taea e te Taq polymerase noa te whakanui i nga waahanga whainga nui atu i te 5 kb. Ko te Taq polymerase me nga whakarereke motuhake, tetahi atu polymerase pono ranei, me tohu ki te whakapai ake i te kaha o te toronga, me te whakatutuki i nga hiahia o te waahanga kaha roa. Hei taapiri, ko te whakarahi i nga waahanga roa ka hiahia ano kia whakatikatika i te hoahoa tuatahi, te waa whakahekenga, te waa toronga, te buffer pH, me etahi atu. Hei aukati i te kino o te tauira, me whakaiti te waa whakaheke i te 94 ° C ki te 30 hekere iti iho ranei mo ia huringa, me te wa e piki ai te mahana ki te 94 ° C i mua i te whakarahinga kia iti iho i te 1 meneti. Ano hoki, ko te tautuhi i te mahana whakawhaanui mo te 68 ° C me te hoahoa i te waa whakaroanga kia rite ki te tere o te 1 kb / min ka taea te whakarite kia kaha te whakanui i nga waahanga roa.
Ka taea te whakaheke i te reanga hapa o te whakanui PCR ma te whakamahi i nga momo polymerases DNA me te pono pono. I roto i nga Taq DNA polymerases katoa i kitea i tenei wa, ko te Pfu enzyme te reiti hapa iti me te pono pono (tirohia te teepu piri). I tua atu i te whiringa o te whākōkī, ka taea e ngā kairangahau te whakaheke i te reanga irakētanga PCR mā te whakarerekē i ngā tikanga tauhohenga, tae atu ki te whakarerekētanga o te whakahanumi, te kukū o te polymerase wera me te whakanui i te tau huringa PCR.
Nga waahanga hua
NO TE AHA I KORE AI
Mai i tana whakaturanga, ko ta maatau wheketere kei te whakawhanake i nga hua o te ao tuatahi me te pupuri i te kaupapa
Tuhinga o mua. Kua pai te rongonui o a maatau hua i te umanga me te reanga pono i waenga i nga kaihoko hou me nga tawhito.
- Waea: +86 010-59822688
- Whare 5, Nama 86, Shuangying West Road, Changping District, Beijing.
- people@tiangen.com
